Présentation cytométrie

UMS33

SERVICE DE CYTOMETRIE EN FLUX

Responsable scientifique et technique de la cytométrie en flux

Clay Denis - IE1 INSERM

Tél: 0145595304

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Presentation

PRESENTATION

Le plateau technique de cytométrie en flux est un service indispensable pour l'avancement des projets des différentes unités au sein de la structure fédérative régionale SFR du site de l'Hôpital Paul Brousse. Les chercheurs qui font appel à ce plateau travaillent dans des domaines variés tels que les cellules souches embryonnaires, les cellules souches adultes et leur microenvironnement, la cancérologie, l'hématologie ou bien encore l'hépatologie.

Ce service de cytométrie est accessible à tout utilisateur (interne ou externe au site) exprimant des besoins en cytométrie en flux et en tri cellulaire.

La qualité de ce service est maintenue par:

Recherche et développement avec la mise en place de techniques innovantes et de projets collaboratifs.
Constante amélioration des appareils

EQUIPEMENT

Trieur cellulaire

BD FacsAria SORT (5 lasers, 16 détecteurs de fluorescence, PMT FSC)

Analyseurs

BD Fortessa (4 lasers, 14 détecteurs de fluorescence, PMT FSC, SSC en 405nm)
Deux BD Accuri (1 laser et 1 diode, 4 détecteurs de fluorescence) dont un avec un passeur (Sampler plus)

TECHNIQUES

L'expertise de ce plateau technique permet de proposer les prestations suivantes:

Caractérisations des cellules souches et tris d'événement rares CSH, CSE, CSC, CSM...)
Tri et analyse multiparamétrique des cellules souches couplées à des fonctionnalités cellulaires (Side Population, ALDH).
Tri clonale avec caractérisation de chaque cellule (index sort BD).
Cycle cellulaire sur cellules vivantes (Hoechst, Pyronin Y) ou fixées (phase du cycle, cyclines), ploïdie, prolifération, apoptose.
Analyse et tri de microparticules / microvésicules.
Analyse er tri de spermatozoîdes.
Marquage multicolore extra (>10) et intracellulaire
Mesure d'une activité cellulaire (Pompes MDR, Flux calcique)

Equipements

FacsAria

BD FacsAria SORP

aria

Le trieur est un FacsAria dit Sorp spécialement conçu pour la recherche.

Il est équipé de 5 sources d'excitation (355, 405, 488, 561, 633 nm) et d'un PMT sur le paramètre taille FSC permettant la détection et le tri de microparticules / microvésicules. Un vrai laser UV a été installé pour une meilleure détection des cellules souches de phénotype "Side Population".

19 paramètres sont disponibles dont 16 en fluorescence (PMT) + un PMT en FSC (microparticules / microvésicules > 0,2μm).

ce trieur est dédié aux tris de cellules de classe L1 et L2 ne contenant pas d'agents pathogènes pour l'homme.

Configuration optique

Laser	Puissance⁽¹⁾	Filtres⁽²⁾	Fluorochromes
Genesis UV/355 nm	100mW	BP450/50 LP670	Hoechst 33342 bleu, Dapi, Indo-1 Hoechst 33342 rouge
Obis 405 nm	100mW	BP450/50 BP525/50 BP610/20 BP670/30	Brillant Violet 421, BD Horizon V450, Pacific Blue, CFP, SYTOX Blue, eFluor450, DAPI Brillant violet 510, BD Horizon V500, AmCyan, Qdot525 Brillant violet 605, Qdot605, BD Horizon 605 Brillant violet 650, Qdot655
SapphireHP 488 nm	100mW	BP488/10 BP530/30 BP695/40	SSC FITC, Alexa Fluor 488, GFP, YFP, SYTOX Green PerCp, PerCp-Cy5-5, IP, 7AAD
SapphireHP 561	100mW	BP585/15 BP610/20 BP670/30 BP710/50 BP780/60	PE, DsRed, dTomato PE-texas red, IP, mCherry, mRasberry, mStrawberry, mRFP PE-Cy5, 7AAD, PE-Cy5.5 Pe-Alexa 700 PE-Cy7
Obis 640 nm	40mW	BP670/30 BP730/45 BP780/60	APC, Alexa Fluor 647, SYTOX Red Alexa Fluor 700 APC-Cy7, APC-H7

(1) Puissance des lasers ajustable par fonction logicielle; (2) Filtres et miroirs dichroïques interchangeables

Applications

Tri 1 à 4 voies en micro-tubes, Eppendorf, 12x75 mm et 15ml. En réglages manuels, possibilité de trier sur une plaque 96 puits
Température contrôlée des échantillons (4ºC ,20ºC ,37ºC ou 42ºC)
Cellules Souches (Side population : Exclusion de Hoechst 33342)
Tri en plaque de 6/12/48/96 puits
Clonage de populations en plaque de 96/384 puits avec caractérisation phénotypique (BD Index sort)

Fortessa

Becton dickinson Fortessa

Cet analyseur est équipé de 4 sources d'excitation, d'un PMT sur le paramètre taille FSC permettant la détection de microparticules / microvésicules (>0,2µ) et d'un SSC sur le laser 405nm. Un vrai laser UV a été installé pour une meilleure détection des cellules souches de phénotype "Side Population".

- 4 lasers: Ultraviolet (355nm/UV), Violet (405nm), Bleu (488nm) and Rouge (635nm)

- Analyse multicouleurs jusqu’à 19 paramètres dont 16 fluorescences (PMT)

- Vitesse d'acquisition jusqu’à 20000 événements/seconde

Cet appareil est dédié aux analyses de cellules de classe L1 et L2 ne contenant pas d'agents pathogènes pour l'homme.

Configuration optique

Laser	Puissance⁽¹⁾	Filtres⁽²⁾	Fluorochromes
Genesis UV/355 nm	20mW	BP450/50 LP670	Hoechst 33342 bleu, Dapi, Indo-1 Hoechst 33342 rouge
Coherent Cube 405 nm	50mW	BP405/20 BP450/50 BP525/50 BP610/20 BP670/30 BP710/50 BP780/60	SSC Brillant Violet 421, BD Horizon V450, Pacific Blue, CFP, eFluor450 Brillant violet 510, BD Horizon V500, AmCyan, Qdot525 Brillant violet 605, Qdot605, BD Horizon 605 Brillant violet 650, Qdot655
Coherent Sapphire 488 nm	50mW	BP488/10 BP530/30 BP575/26 BP610/20 BP695/40 BP780/60	SSC FITC, Alexa Fluor 488, GFP, SYTOX Green, YFP PE PE-texas red, IP PerCp, PE-Cy5, PE-Cy5.5, PerCp-Cy5-5, IP, 7AAD PE-Cy7
Coherent Cube 635 nm	40mW	BP670/30 BP730/45 BP780/60	APC, Alexa Fluor 647, SYTOX Red Alexa Fluor 700 APC-Cy7, APC-H7, Alexa Fluor 750, DRAQ5

(1) Puissance des lasers ajustable par fonction logicielle; (2) Filtres et miroirs dichroïques interchangeables

Accuri C6

Becton dickinson Accuri C6

accuri C6

Le BD Accuri C6 est un analyseur (4 couleurs) de faible encombrement. Il est facile d'utilisation ainsi que son logiciel d'acquisition (BD Accuri). Comptage absolu des populations cellulaires (pompes péristaltiques) permettant de déterminer leurs concentrations cellulaires (cellules/μl).

Il y a deux BD Accuri C6 dont un est équipé d'un passeur (SamplerPlus).

Caractérisques:

- Analyse multicouleurs (4 couleurs) + FSC, SSC

- 7 décades (log)

- Numération cellulaire (comptage absolu)

- MESF: FITC < 150, PE < 100

- Taille minimale détectable: 0,5μ

- Vitesse d'acquisition: 10000 événements/sec max

Configuration optique

Laser/Diode

Puissance

Filtres⁽¹⁾

Fluorochromes

Laser 488 nm

15mW

BP488/10

BP533/30

BP585/40

LP670

SSC

FITC, Alexa Fluor 488, GFP, SYTOX Green, YFP

PE, IP

PerCp, PE-Cy5, PerCp-Cy5-5, IP, 7AAD

PE-Cy5.5, PE-Cy7

Diode 640 nm

14,7mW

BP675/25

APC, Alexa Fluor 647, SYTOX Red

(1) Possibilité de mettre des filtres atténuateurs (90% et 99%) en FL1 et FL2 pour les fortes fluorescences (ex: GFP)

Prestations de service / Tarifs

Les services proposés sont les suivants:

Formation et encadrement des utilisateurs aux techniques de cytométrie sur les cytomètres et sur les logiciels d'analyses (FacsDiva, Flowjo, Weasel).
Accès aux analyseurs en libre-service aprés avoir préalablement suivi une formation théorique et pratique. Un calendrier de réservation en ligne est librement accessible (accès sur demande).
Participation à l'élaboration de projets et à l'examen de leur faisabilité. Conception de protocoles expérimentaux adaptés afin d'analyser et, le cas échéant, trier la ou les populations d'intérêt (1 à 4).

Pour plus d'informations sur les prestations et les tarifs proposés, n'hésitez pas à me contacter.